Infeksi nosokomial dapat dikurangi dengan mencuci tangan menggunakan antiseptik yang mengandung alkohol. Pemakaiannya yang efektif dan efisien menjadi daya tarik tersendiri sehingga alkohol banyak dibutuhkan. Meningkatnya kebutuhan tersebut menyebabkan terjadinya kelangkaan. Pemanfaatan limbah dari daun bambu dapat digunakan sebagai bahan baku untuk asap cair yang berpotensi sebagai antiseptik karena mengandung senyawa fenol dan asam yang memiliki sifat antimikroba (antibakteri dan antijamur). Tujuan penelitian ini untuk mengetahui efektivitas asap cair daun bambu (Bambusa sp) sebagai antiseptik secara in vitro dan in vivo. Uji in vitro menggunakan metode difusi cakram dan metode sumuran. Sedangkan uji in vivo menggunakan metode Total Plate Count (TPC) dengan sampel swab telapak tangan responden perempuan dan laki-laki. Hasil in vitro terdapat zona hambat pada Escherichia coli (3,6 mm) dan Staphylococus aureus (5,5 mm) dari asap cair daun bambu 100%, sedangkan pada Aspergillus flavus dan Candida albicans tidak terdapat zona hambat (0,0 mm). Hasil in vivo terdapat penurunan jumlah bakteri (80%) dan jamur (39%). Hasil data kuisioner didapatkan responden menyukai warna (50%), aroma (42%), tidak menimbulkan kekeringan (100%) dan tidak menimbulkan efek samping lainnya (67%). Asap cair daun bambu (Bambusa sp) memiliki potensi sebagai antiseptik.Kata kunci : Antiseptik, Asap Cair, Daun Bambu