Tujuan dalam penelitian ini yaitu untuk mengetahui pengaruh video animasi Pop Up terhadap peningkatan literasi sains anak usia dini (usia 5-6 tahun) kelompok B. Penelitian ini dilakukan di TK Aisyiyah 20 Surabaya, medode yang gunakan adalah metode kuantitaif dengan desain penelitian pre-eksperimental meliputi jenis one-group pre-test post-test design, dalam penelitian ini peneliti menggunakan satu kelompok kelas yang berjumlah 17 orang. Tahapan dalam penelitian ini meliputi pre-test, perlakuan (treatment), dan post-test. Teknik pengumpulan datanya menggunakan teknik observasi dan dokumentasi. Teknik analisis data menggunakan Uji Wilcoxon Signed Rank Test untuk mengetahui jumlah selisih nilai sebelum dan sesudah diberikan perlakuan (treatment) untuk mengetahui tingkat signifikansi. Hasil analisis data yang diperoleh yaitu nilai Asymp.Sig. (2-tailed) bernilai 0,000 < 0,05. Karena kurang dari 0,05, maka sebagaimana dasar pengambilan keputusan uji Wilcoxon, menunjukan H0 ditolak. Sehingga dapat disimpulkan bahwa Adanya pengaruh yang signifikan penerapan video animasi pop up terhadap peningkatan literasi sains anak usia dini (usia 5-6 tahun) di TK Aisyiyah 20 Surabaya. Penerapan media video animasi pop up sangat berpengaruh secara signifikan terhadap literasi sains anak usia dini (5-6 tahun) kelompok B karena media video animasi pop up yang dilakukan oleh peneliti, dapat meningkatkan literasi sains anak usia dini (5-6 tahun), dapat menambah wawasan pengetahuan dan pengalaman baru peserta didik, dapat menumbuhan motivasi belajar anak, dan dapat menarik konsentrasi peserta didik.