SUBKLONING DAN EKSPRESI Gen fim-C S. typhimurium - Ulfah Choiriyah; Muktiningsih Nurjayadi; Fera Kurnia Dewi (Jurnal Riset Sains dan Kimia Terapan, 2013)
Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh rekombinan pET-30a-fim-C S. typhimurium hasil subkloning dan protein rekombinan Fim-C S. typhimurium hasil ekspresi serta mengetahui karakter subklon rekombinan dan protein rekombinan yang dihasilkan. Metode yang digunakan adalah eksplorasi. Plasmid rekombinan pGEM-T-easy-fim-C S. typhimurium dari penelitian sebelumnya dipotong dengan dua enzim restriksi yaitu BamHI dan HindIII. Gen fim-C S. typhimurium tersebut diligasi pada vektor ekspresi pET-30a dan ditransformasi dengan sel inang E. coli TOP- 10F’ untuk memperoleh plasmid pET-30a-fim-C S. typhimurium. Hasil rekombinan dikarakterisasi dengan metode size screening, PCR koloni, analisis enzim restriksi dan sekuensing untuk mengetahui keberhasilan transformasi yang dilakukan. Hasil karakterisasi menunjukkan pET-30a-fim-C S. typhimurium mengandung sisipan gen fim-C S. typhimurium berukuran 0,7 kb homolog 100% dengan S. typhimurium str. Lt2 pada GeneBank. Plasmid rekombinan pET-30a-fim-C S. typhimurium ditransformasi dengan sel inang E. coli ArcticExpress (DE3) yang memiliki sistem transkripsi dan translasi sehingga diperoleh protein rekombinan. Overekspresi menghasilkan protein yang tidak larut dalam sitoplasma atau membentuk inclusion bodies. Protein rekombinan Fim-C S. typhimurium dikarakterisasi dengan SDS-PAGE sehingga diperoleh pita overekspresi protein pada ukuran diantara 25 kDa dan 35 kDa. Hasil ini diperkuat dengan analisis menggunakan program DNAStar menunjukkan ukuran protein rekombinan Fim-C S. typhimurium sebesar 31 kDa. Dari penelitian ini disimpulkan bahwa subkloning dan ekspresi gen fim-C S. typhimurium telah berhasil dilakukan yang akan digunakan pada penelitian selanjutnya. Kata kunci: Salmonella typhimurium, gen fim-C S. typhimurium 0,7 kb, subkloning gen fim-C S. typhimurium, ekspresi gen fim-C S. typhimurium, protein rekombinan Fim-C S. typhimurium 31 kDa This research aims to obtain pET-30a-fim-C S. typhimurium recombinant from subcloning results and Fim-C S. typhimurium recombinant protein from expression results and to know characters recombinant subclone and recombinant protein produced. This research is exploration.Steps of this research are pGEM-T-easy-fim-C S. typhimurium recombinant plasmid from previous research is cut with two restriction enzymes, BamHI dan HindIII. fim-C S. typhimurium gene is ligated to the expression vector pET-30a and transformed with E. coli TOP-10F’ as host cell to obtain pET-30afim-C S. typhimurium plasmid. The recombinant results is characterized by size screening, PCR colony, restriction enzymes analysis and sequencing method to know the successful transformation performed. Characterization shows that pET-30a-fim-C S. typhimurium contain fim-C 0,7 kb of S. typhimurium gene insert have 100% homology with S. typhimurium str. Lt2 in GeneBank. pET-30a-fim-C S. typhimurium recombinant plasmid is transformed to E. coli ArcticExpress (DE3) as host cell which has transcription and translation system so that obtained recombinant protein. Overexpression produces insoluble protein in the cytoplasm or forming inclusion bodies. Fim-C S. typhimurium recombinant protein is characterized by SDS-PAGE so that obtained overexpression protein band size between 25 kDa and 35 kDa. These results were confirmed by analysis using DNASTAR’s program that shows the size of Fim-C S. typhimurium recombinant protein is 31 kDa. From this research, we can concluded that subcloning and expression fim-C S. typhimurium gene has been successfully and this protein can be used in further research. Keyword: Salmonella typhimurium, fim-C 0,7 kb of S. typhimurium gene, subcloning fim-C S. typhimurium gene, expression fim-C S. typhimurium gene, Fim-C 31 kDa of S. typhimurium recombinant protein