KLONING GEN FIM-C SALMONELLA TYPHIMURIUM DENGAN VEKTOR pGEM-T easy UNTUK PENGEMBANGAN VAKSIN REKOMBINAN PENYAKIT TYPHUS PADA MANUSIA - Muktiningsih Nurjayadi; Giri Alviyanto; Fera Kurnia Dewi; Irma Ratna Kartika; Fernita Puspasari; Dessy Natalia (Jurnal Riset Sains dan Kimia Terapan, 2013)
Bakteri Salmonella typhimurium merupakan penyebab penyakit typhus pada hewan mencit. Bakteri ini sering digunakan sebagai model untuk mempelajari penyakit typhus pada manusia. Penelitian ini bertujuan mendapatkan klon rekombinan gen fim-C Salmonella typhimurium dengan ukuran 0,7 kilobasa (pGEM-TStpm-fim-C) dan mengetahui karakteristik gen fim-C Salmonella typhimurium hasil kloning tersebut. Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah metode eksploratif. Tahap yang dilakukan meliputi isolasi DNA genom S. typhimurium, amplifikasi gen fim-C S. typhmurium dengan metode PCR, karakterisasi gen fim-C S. typhimurium hasil amplifikasi, purifikasi gen fim-C S. typhimurium, kloning gen fim-C S. typhimurium dengan vektor pGEM-T easy, dan karakterisasi hasil kloning. Amplifikasi gen fim-C dengan metode PCR menggunakan primer FimC-Stpm-F dan FimC-Stpm-R menghasilkan pita DNA berukuran 0,7 kilobasa sesuai ukuran gen fim-C S. typhimurium. Kesesuaian tersebut menunjukkan bahwa desain dan sintesis primer serta amplifikasi berhasil dilakukan. Hasil kloning gen fim-C S. typhimurium 0,7 kb dengan vektor kloning pGEM-T easy memberikan koloni putih dan biru dengan ukuran yang sesuai stÃ¡ndar. Analisis restriksi plasmid rekombinan pGEM-T-Stpmfim-C dengan enzim BamHI dan HindIII menghasilkan dua pita berukuran 3 kb dan 0,7 kb sesuai ukuran DNA vektor pGEM-T easy dan gen fim-C S. typhimurium sebagi insert. Sekuensing klon rekombinan yang dihasilkan membuktikan bahwa urutan DNA S. typhimurium yang diperoleh memiliki homologi sebesar 99% dengan S.typhimurium LT2 pada GeneBank. Berdasarkan data-data tersebut disimpulkan bahwa pada penelitian ini telah berhasil dilakukan kloning gen fim-C S. typhimurium berukuran 0,7 kb pada vektor pGEM-T easy. Kata kunci : Salmonella typhimurium, kloning gen fim-C S. typhimurium, vaksin rekombinan, penyakit typhus. Salmonella typhimurium is bacteria that causes typhus disease in mouse. Usually, Salmonella typhimurium is used as a model for typhus disease study in human. The research is aimed to obtain recombinant clone of Salmonella typhimurium fim-C gene 0.7kilobase(kb) and knowing characteristics of Salmonella typhimurium gene the cloning result. Method of this research is exploration. Step of this research are isolate DNA genome of S. typhimurium bacteria, amplifÃcate fim-C gene by PCR, characterize S.typhimurium fim-C the amplification product, purification of S.typhimurium fim-C gene, cloning of S.typhimurium fim-C gene with pGEM-T easy vector, characterize the cloning product. Amplification of fim-C gen by PCR used FimC-Stpm- primer and FimC-Stpm-R primer produce DNA band 0.7kilbase appropriate with size of S.typhimurium fim-C gene. This result showing design, primer synthesis, and amplification has been succesfully. The cloning result from S.typhimurium fim-C gene 0.7kb with cloning vector pGEM-T easy give white colony and blue colony. The restriction analysis of recombinant plasmid pGEM-T-Stpm-fim-C with BamHI and HindIII enzyme produces two band 3 kb and 0.7 kb which appropriate size of DNA pGEM-T-easy vector and S.typhimurium fim-C gene as insert. Sequencing of recombinant clone proving DNA S.typhimurium have 99% homolog wh S.typhimurium LT2 in GeneBank. ConclusiÃ³n this research is cloning of S.typhimurium fim-C gene 0.7kb with pGEM-T easy has been succesfully. Keywords: Salmonella typhimurium, cloning of Salmonella typhimurium fim-C gene, recombinant vaccine, typhus disease.