DELETION ANALYSIS OF A XYLANASE GENE FROM FIBROBACTER SUCCINOGENES S 85 AND ITS EXPRESSION IN ESCHERICHIA COLI HB 101 - Suryadi, Y. (JURNAL BIOLOGI INDONESIA, 2008)
ABSTRAKAnalisis Delesi Gen Xilanase Asal Fibrobacter succinogenes S 85 dan Ekspresinyapada Escherichia coli HB 101. Plasmid pBX6 dengan sisipan DNA berukuran 3 Kb asalDNA genomik Fibrobacter succinogenes S 85, menyandi aktifitas xilanolitik (mampumendegradasi substrat xilan) bila ditumbuhkan dalam vektor E. coli HB 101. Tujuanpenelitian ini adalah untuk mengidentifikasi lokasi fragmen DNA yang berperan dalammenentukan aktifitas pBX6 menggunakan analisis delesi. Suatu seri analisis delesi terhadappBX6 telah dilakukan dengan menghilangkan beberapa fragmen DNA dengan cara kloninghasil restriksi enzim maupun PCR. Satu fragmen delesi asal produk PCR berukuran 0.7Kb di sub kloning menggunakan cloning kit pCR TOPO dan aktifitas xilanolitiknya ditapislebih lanjut dengan menumbuhkan dalam media agar oat spelt xylan-Remazol brilliantblue (RBB) ditambah antibiotik ampicilin (50 ?g/ml). Transforman positif selanjutnyadiekstraksi dan dikarakterisasi. Hasil penelitian menunjukkan klon yang telah terpotongkehilangan sebagian besar aktifitas xilanolitiknya dibanding klon asal, bila diuji pada kondisiyang sama untuk menghidrolisis substrat xilan. Klon plasmid rekombinan yang telahterpotong menunjukkan aktifitas spesifik sebesar 41,29 + 0,025 U/mg.Key word: Delesi, F. succinogenes S 85; E. coli HB 101, xilanase