Development of GAL4/VP16 Facilitated-enhancer Trap System for Rice Crop Improvement - Kurniati, Sri; Kilian, Andrzej (Jurnal AgroBiogen, 2009)
Pengembangan Sistem Perangkap Enhancer yang Difasilitasioleh Aktivator Transkripsi GAL4/VP16 untuk PerbaikanTanaman Padi. Sri Koerniati dan Andrzej Kilian.Peningkatan produksi padi untuk memenuhi kebutuhannasional dilakukan melalui perbaikan tanaman, termasukpencarian dan isolasi gen-gen baru melalui mutasi. Aplikasiberbagai sekuen mutagen, elemen loncat atau T-DNA, didukungdengan teknik PCR merupakan perdekatan yang lebihbaik dibandingkan dengan metode klasik. Perangkap enhanceradalah sistem yang dikembangkan untuk mengatasimasalah rendahnya tingkat perolehan mutan, akibat banyakgen berfungsi sama atau satu gen berfungsi pada beberapatingkat perkembangan tanaman. Sistem ini mampu menampilkanekspresi pada jaringan tertentu (spatial) dan ataupada waktu tertentu (temporal) pada tanaman hemizigot(hemizygous plants). Penelitian ini bertujuan untuk (1) mengembangkanvector cassette perangkap enhancer dengankomponen utama aktivator transkripsi GAL4/VP16 dan duagen reporter (gus dan gusPlus), dan (2) memperoleh informasitentang ekspresinya pada padi. Sepuluh vector diperolehdan ditransformasikan ke kalus padi Nipponbare danMillin dengan Agrobacterium tumefaciens. Kajian vektormelalui ekspresi gen reporter diamati pada kalus 3 harisetelah co-cultivation dan jaringan vegetatif dari 745 linipenangkap enhancer. Sembilan puluh lima persen nomormemiliki ekspresi dan persentase lebih tinggi daripada yangtelah dilaporkan sebelumnya. Lini dengan vektor GAL4/VP16delesi tidak memiliki ekspresi pada kalus dan jaringan vegetatif,walaupun hasil Southern Blot menunjukkan tanamanini memiliki dua T-DNA. Tiga puluh dua persen lini gusPlusmemiliki ekspresi yang kuat, sedangkan 30% berekspresilemah dibandingkan dengan masing-masing 12% dan 47%untuk lini gus. Lini gusPlus juga tersebar pada lebih banyakpola ekspresi. Jumlah insersi pada lini perangkap enhancerberkisar antara 1-7 T-DNA dan 49% di antaranya memilikisatu T-DNA. gusPlus merupakan gen reporter yang lebihsensitif daripada gus dan GAL4/VP16 terbukti berfungsi.