Expression and Characterization of Recombinant Protein of J-SU pGEX either by Single or Double Cell Lysis - Margawati, Endang Tri; Ridwan, Muhamad (Universitas Atma Jaya Yogyakarta, 2009)
Penelitian ini dimaksudkan untuk optimasi produk protein rekombinan Superficial Unit dari virus Jembrana (JSU) yang dieksperikan melalui pemecahan sel secara tunggal dan ganda dengan sistem pGEX dalam skala flask 100ml media kultur. Dua metode pemecahan sel yang digunakan yaitu Freeze and Thaw (FT) sebagai pemecahan tunggal dan gabungan FT dan Sonikasi sebagai pemecahan ganda. Sel inang (E. Coli pembawa konstruk JSU pGEX) ditumbuhkan dengan induksi IPTG pada 37oC dengan pengocok berkecepatan 200rpm sampai mencapai kepadatan sel 0,8. Sel atau pelet dikoleksi dengan sentrifugasi, pelet dipecah dengan 2 perlakuan pemecahan sel tunggal dan ganda. Hasil pemecahan sel disentrifugasi untuk dikoleksi peletnya sebagai inclusion body. Solubilisasi dilakukan terhadap inclusion body dengan solubilisasi buffer dan diperoleh substrat protein JSU kemudian dimurnikan melalui Gluthation sepharose 4B (500Î¼l resin) dengan metode batch capture. Hasil karakterisasi dengan SDS PAGE dan Western Blotting menunjukkan ukuran protein JSU pGEX yang tepat yaitu 60kDa pada kedua sistem pemecahan sel. Namun demikian, pemecahan sel secara tunggal menghasilkan protein murni JSU pGEX lebih besar (0.812ng/ul) dibanding pemecahan sel secara ganda (0.486ng/ul). Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa protein rekombinan JSU pGEX terekspresi lebih baik dengan metode pemecahan sel Freeze and Thaw.