RETRANSFORMATION AND EXPRESSION OF RECOMBINANT VIRAL PROTEIN OF JEMBRANA JSU AND JTat (JSU AND JTat) IN pGEX SYSTEM [Retransformasi dan Ekspresi Protein Virus Rekombinan JSU dan JTat Penyakit Jembrana dalam Sistem pGex] - Endang T Margawati; Andi Utama; Indriawati Indriawati (Research Center for Biology-Indonesian Institute of Sciences, 2008)
Genom virus penyakit Jembrana setidaknya memiliki 3 gen besar yang menyandi protein dan beberapa di antaranya diperlukan untuk replikasi virus. Protein JSU dan JTat diduga dapat menginduksi kekebalan yang protektif pada sapi Bali terhadap penyakit Jembrana sehingga keduanya sangat berpotensi untuk dipakai sebagai vaksin rekombinan. Penelitian ini dirancang untuk meretransformasi protein rekombinan JSU dan JTat ke dalam Escherichia coli menggunakan sistem pGEX. Konstruk JSU dan JTat dalam pGEX dikoleksi plasmidnya dengan metode miniprep dan kemudian diretranformasikan ke dalam E. coli strain BL21 dan DH5a. JSU dan JTat hasil retransformasi diekspresikan pada medium LB untuk skala produksi kecil dengan sistem pGEX. Hasil penelitian ini meminjukkan bahwa kedua JSU dan JTat hasil retransformasi ke dalam E. coli strain BL21 terlihat tumbuh lebih baik pada medium LB jika dibandingkan retransformasi ke dalam E. coli strain DH5a. Hasil retransformasi JSU dan JTat dikarakterisasi dan diidentifikasi dengan Western blotting dan tampak menunjukkan ukuran protein yang benar, yaitu protein rekombinan JSU berukuran 60kDa dan JTat berukuran 36,7kDa. Protein rekombinan JSU muncul dengan pita tunggal dan lebih jelas jika dibandingkan dengan protein JTat. Konsentrasi protein JSU sedikit lebih rendah (1,883 mg ml ) jika dibandingkan dengan JTat (l,981mg ml').Penelitian ini menunjukkan bahwa JSU pGEX masih tersimpan dan diekspresikan dengan baik, sementara JTat mungkin perlu dilakukan perakitan ulang untuk memantapkan ekspresinya.