Kloning Gen Coat Protein (CP) Carnation Mottle Virus (CarMV) pada Vektor Ekspresi [Cloning of Carnation Mottle Virus (CarMV) Coat Protein Gene into Expression Vector] - Diningsih, Erniawati (Indonesian Center for Horticulture Research and Development, 2021)
Carnation mottle virus (CarMV) termasuk anggota genus Carmovirus dalam famili Tombusviridae. Virus ini banyak ditemukan menginfeksi tanaman anyelir di Jawa Barat dan menyebabkan gejala mottle. Sebagai langkah awal untuk memproduksi antiserum melalui teknik ekspresi gen CP perlu diklon pada vektor yang sesuai. Penelitian ini bertujuan mendapatkan klon CarMV yang berfungsi melalui kloning dan subkloning gen CP CarMV ke dalam vektor ekspresi yang sesuai. Penelitian dilakukan dalam beberapa tahap, yaitu ekstraksi RNA total dan amplifikasi cDNA CarMV dengan RT-PCR, menggunakan primer spesifik CarMVF dan CarMVR yang mengandung situs enzim restriksi XhoI dan BamHI, kloning dan subkloning DNA sisipan, serta konfirmasi transforman. Rekombinan gen sisipan CP CarMV dalam bakteri dikonfirmasi dengan koloni PCR. Gen CP CarMV berhasil dikloning ke dalam TA vektor pTZ57R/T dan disubkloning ke vektor ekspresi pET28a. Sekuen rekombinan CP CarMV berhasil dikonfirmasi melalui perunutan DNA. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mendapatkan produksi antigen rekombinan yang melimpah pada bakteri ekspresi dan kondisi yang sesuai.KeywordsDianthus caryophillus L.; Carmovirus; Kloning; Subkloning; Bakteri ekspresiAbstractCarnation mottle virus (CarMV) is a type member of Carmovirus genus in family of Tombusvirus. The virus infects carnation plants in the centre area production of West Java and it cause mottle symptoms. The research aimed to obtain functional clone(s) of CarMV CP gene in suitable expression kloning vector. The research was carried out through several steps, namely total RNA extraction and amplification of cDNA of CP CarMV by RT-PCR using specific primer pairs CarMVF and CarMVR containing restriction enzyme sites XhoI and BamHI, respectively, TA cloning, and subcloning into expression vector pET28a and confirmation of recombinant plasmids by colony PCR. CarMV CP gen was successfully cloned into TA cloning vector pTZ57R/T and subcloned into vector pET28a, alsowere confirmed by DNA sequencing. Future experiment is necessary to be conducted to obtain abundance recombinant antigen production of CarMV CP in suitable expression condition and bacterial host.