OPTIMASI ISOLASI PROTEIN NANOBODI DARI Escherichia coli BL21 (DE3) DENGAN VARIASI KONSENTRASI BUFFER LISIS - Oktaviani, Novi; Setiani, Nur Asni; Mardiah, Irma (Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia, 2024)
Bakteri Escherichia coli mengekspresikan nanobodi rekombinan sebagai protein intraseluler sehingga untuk memperolehnya perlu dilakukan isolasi protein. Banyak faktor yang mempengaruhi proses isolasi, diantaranya konsentrasi buffer Tris HCl yang berperan dalam menstabilkan protein dan pH ketika sel dilisiskan. Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh konsentrasi buffer Tris HCL dan mendapatkan konsentrasi optimum dalam proses lisis sel. Plasmid pET28a-Nb yang berisi gen pengkode nanobodi ditransformasikan ke dalam sel kompeten Escherichia coli BL21 (DE3) dan diekspresikan pada suhu 25C dengan penambahan IPTG 0,6mM. Kultur hasil ekspresi diisolasi dengan menambahkan buffer Tris HCl pada variasi 5 mM, 10 mM, dan 20 mM, lalu disonikasi selama 30 menit pada gelombang 37 kHz. Validasi dilakukan melalui SDS PAGE. Hasil penelitian menunjukkan pada konsentrasi 10 mM dihasilkan jumlah pelet terbesar yaitu 0,09 g dan validasi SDS PAGE menunjukkan ketebalan pita tertinggi dengan nilai AUC 36773,153 piksel. Dapat disimpulkan bahwa penambahan buffer Tris HCl 10 mM merupakan konsentrasi yang optimum untuk mengisolasi nanobodi rekombinan.