Isolasi Bakteri Penghasil Enzim Protease Alkalin Termostabil - Alina Akhdiya (Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian, 2003)
AbstractIn the effort of obtaining indigenous alkaline thermosteble protease producing bacteria, 17 different soil samples collected from slaughterhouses, fish ponds along the Nusa Tenggara, and spoiled milk disposal sites in Boyolali (Central Java) for microbial isolation. Out of the 1004 colonies obtained, 29 isolates showed proteolytic index ≥3.00. Enzymatic assay on these isolates resulted in two isolates (BYL-15 and BYL-28) with highest crude enzyme activity, this activity was also higher than that achieved by the standard bacteria (Bacillus firmus NRRL B-1107). After 36 hours of incubation, crude enzyme activity and specific activity of isolate BYL-15 were 106.45 U/ml filtrate and 5069.04 U/mg protein, respectively (at 50°C and pH 10.5). Whereas for isolate BYL-28 the crude enzyme activity and specific activity were 100.00 U/ml filtrate and 5,263.15 U/mg protein, respectively. The activity of these two isolates were about 10 times higher than that of the B. firmus (11.259 U/ml filtrate), whereas their specific activities were about 40 times than that of B. firmus (119.78 U/mg protein). Further studies showed that the proteolytic activity of these two isolates were still increased when assayed at 60°C, and more than one peak of activity were obtained when assayed at different pH values (8.5-12). Based on microscopic observations, these two isolates showed cell morphology characteristics of Actinomycetes. AbstrakDalam upaya menggali galur-galur bakteri penghasil enzim protease alkalin termostabil asli Indonesia, telah dilakukan isolasi mikroorganisme dari 17 contoh tanah yang diambil dari beberapa rumah pemotongan hewan dan tambak di Nusa Tenggara, serta tempat pembuangan susu rusak di Boyolali (Jawa Tengah). Dari 1004 isolat yang diperoleh, 29 di antaranya memiliki indeks proteolitik ≥3,00. Pengukuran terhadap aktivitas enzim isolat-isolat tersebut menghasilkan isolat BYL- 15 dan BYL-28 yang memiliki aktivitas enzim kasar yang lebih tinggi dibandingkan dengan bakteri pembanding (Bacillus firmus NRRL B-1107). Aktivitas enzim kasar dan aktivitas spesifik isolat BYL-15 setelah 36 jam berturut-turut adalah 106,45 U/ml filtrat biakan dan 5069,04 U/mg pada suhu 50°C dan pH 10,5. Aktivitas enzim kasar dan aktivitas spesifik isolat BYL-28 adalah 100,00 U/ml filtrat biakan dan 5263,15 U/mg pada kondisi yang sama. Nilai aktivitas enzim kedua isolat tersebut ±10 kali lebih besar daripada B. firmus (11,259 U/ml filtrat), sedangkan aktivitas spesifiknya 40 kali lebih besar daripada B. firmus (119,78 U/mg protein). Penelitian lebih lanjut menunjukkan bahwa aktivitas enzim kasar kedua isolat tersebut masih terlihat meningkat pada suhu 60°C dan memiliki lebih dari satu puncak aktivitas pada beberapa pH yang dicoba (8,5-12,0). Berdasarkan ciri-ciri morfologi yang diperoleh dari pengamatan mikroskopis, kedua isolat tersebut termasuk anggota Actinomycetes.