Two-dimensional gel electrophoresis and immunoblotting for detection of antigenic proteins from natural rubber latex Gel elektroforesis 2-dimensi dan imunobloting untuk deteksi protein antigen dari lateks karet alam - . Siswanto (INDONESIAN RESEARCH INSTITUTE FOR BIOTECHNOLOGY AND BIOINDUSTRY, 2012)
AbstrakLateks karet alam banyak digunakan untuk produksi peralatan medis, industri dan rumah tangga. Reaksi alergi yang disebabkan oleh protein asal lateks telah banyak dilaporkan terutama berkaitan dengan penggunaan sarung tangan asal karet alam. Namun tidak semua jenis protein dari karet alam bisamenyebabkan alergi. Penelitian ini dilakukan untuk mendeteksi jenis protein antigenik yang berasal dari karet alam menggunakan teknik imunobloting. Protein diekstrak dari tiga fraksi sentrifugasi lateks (serum B sebagai fraksi dasar, serum C atau serum sitosolik sebagai fase tengah dan partikel karet sebagai fase atas) dan tujuh jenis sarung tangan komersial, kemudian dipisahkan berdasarkan berat molekulnya melalui Gel elektroforesis 1-D (SDS PAGE) dan 2-D. Selanjutnya untuk deteksi protein antigenik secara immuno-chemiluminescense dilakukan imunobloting menggunakan IgG antibodi poliklonal anti protein lateks dari kelinci putih New Zealand dan diwarnai dengan Sypro Ruby protein blot fluorescence. Hasil imunobloting menunjukkan bahwa tidak semua protein serum C dan serum B bersifat antigenik. Terdapat lebih dari 14 spot protein antigenik yang terdeteksi dari serum C pada posisi pI antara pH 4,2 s/d pH 6,8, serta lebih dari 16 spot protein antigenik yang terdeteksi pada serum B dengan pI antara pH 5,5 s/d pH 7,0. Protein yang bersifat antigenik dalam serum C a.l: dengan BM 43 kDa diduga Hev b 7,01, BM 22 kDa adalah Hev b 3 dan BM 15 kDa adalah Hev b 8. Sedangkan protein antigenik dalam serum B dengan BM 42 kDa diduga adalah Hev b 10, dan BM 39 kDa adalah Hev b 2. Protein yang bersifat antigenik pada sarung tangan yang terdeteksi dengan IgG kelinci anti serum-C antara lain Hev b 5 dengan BM 14 kDa, Hev b 1 (BM 10 kDa), Hev b 6.03 (BM 18 dan 19 kDa), dan Hev b9 (BM 55 kDa). Sedangkan yang terdeteksi dengan antibodi IgG anti serum B antara lain Hev b 6.02 dengan BM 7 kDa, serta Hev b 10 (BM 46 kDa) dan Hev b9 (BM 55 kDa). AbstractNatural rubber latex is widely used for the production of medical, industrial and household devices. Allergic reactions caused by latex proteins have been reported primarily related with the use of natural rubber gloves. However, not all types of proteins from natural rubber can cause allergies. This study was conducted to detect the type of antigenic proteins derived from natural rubber with immunobloting techniques. Proteins were extracted from three fractions of latex centrifugation (Bserum as bottom fractions, C-serum or cytosolic serum asmiddle phase and rubber particles as upper phase) and seven types of commercial gloves, then separated by molecular weight through 1-D gel electrophoresis (SDS PAGE) and 2-D. Detection of antigenic protein byimmuno-chemiluminescense, was performed by immunoblotting using polyclonal antibody IgG anti-protein latex from New Zealand white rabbits and stained withSypro Ruby protein blot fluorescence. Immunobloting results indicate that not all proteins from C-serum and Bserum were antigenic. More than 14 antigenic protein spots were detected in the samples of C-serum at pI between pH 4.2 to pH 6.8, and more than 16 antigenic protein spots were detected in the samples of B-serum at pI between pH 5.5 to pH 7.0. Antigenic proteins detected in C-serum were MW 43 kDa suspected as Hev b 7:01, MW 22 kDa was Hev b 3 and MW 15 kDa was Hev b 8. While the antigenic protein detected in B-serumwith MW 42 kDa was suspected as Hev b 10, and protein with MW 39 kDa was Hev b 2. Antigenic proteins detected on the rubber gloves with rabbit IgG anti-Cserum were Hev b 5 with MW 14 kDa, Hev b 1 (MW 10 kDa), Hev b 6:03 (MW 18 and 19 kDa), and Hev b9 (MW 55 kDa). Whereas antigenic protein of rubbergloves detected with IgG anti-B serum were Hev b 6:02 with MW 7 kDa, and Hev b 10 (46 kDa) and Hev b9 (MW 55 kDa).