Latar belakang: Remaja merupakan kelompok usia yang rentan terhadap penularan HIV/AIDS karena masih terbatasnya pengetahuan tentang edukasi seksual. Kurangnya informasi yang benar dari keluarga, sekolah, maupun media pendidikan kesehatan dapat menyebabkan remaja kurang memahami cara penularan dan pencegahan HIV/AIDS. Oleh karena itu, pendidikan kesehatan yang tepat dan mudah dipahami sangat diperlukan untuk meningkatkan pengetahuan remaja agar mampu melakukan pencegahan sejak dini. Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pendidikan kesehatan dengan media booklet terhadap pengetahuan remaja dalam pencegahan HIV/AIDS di MAN 1 Bantul. Metode: Jenis penelitian ini adalah kuantitatif dengan menggunakan penelitian Quasy-eksperimental dengan rancangan One Group Pretest-Posttes with control group design. Teknik pengambilan sampel menggunakan total sampling dengan jumlah sampel 60 responden yang terdiri dari 30 kelompok intervensi dan 30 kelompok kontrol. Analisis data menggunakan Uji Paired T Test dan Uji Independent T test. Hasil: Terdapat peningkatan pengetahuan remaja yang signifikan pada kelompok intervensi setelah diberikan pendidikan kesehatan dengan media booklet, dari mean 12,77 menjadi 22,10 (nilai p = 0,001). Pada kelompok kontrol tidak terdapat peningkatan yang signifikan, dari mean 12,57 menjadi 15,60 (nilai p = 0,662). Hasil uji Independent T-Test menunjukkan adanya perbedaan peningkatan pengetahuan yang signifikan antara kelompok intervensi dan kelompok kontrol dengan selisih rata-rata sebesar 9,5 (p = 0,001). Simpulan: Terdapat pengaruh Pendidikan Kesehatan dengan media booklet terhadap pengetahuan remaja di MAN 1 Bantul.