Pemeriksaan viral load merupakan bagian penting dalam pemantauan terapi antiretroviral pada orang dengan HIV. Kelancaran pemeriksaan berkaitan dengan ketersediaan fasilitas laboratorium, tetapi juga oleh sistem rujukan spesimen, kualitas spesimen, transportasi, dan kesiapan laboratorium rujukan. Penelitian ini bertujuan menganalisis sistem rujukan spesimen dan pelaksanaan pemeriksaan laboratorium viral load pada orang dengan HIV yang menjalani terapi antiretroviral di Kota Padang. Penelitian menggunakan pendekatan kualitatif dengan desain studi kasus pada Puskesmas Seberang Padang, Puskesmas Pauh, dan laboratorium rujukan RSUP Dr. M. Djamil Padang. Data diperoleh melalui wawancara mendalam, observasi, dan telaah dokumen, kemudian dianalisis secara deskriptif kualitatif dengan triangulasi sumber dan metode. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pengiriman rutin spesimen dilakukan oleh tim puskesmas, sedangkan kurir digunakan pada kondisi tertentu. Ditemukan spesimen dengan volume kurang, lisis, atau lipemik yang memerlukan pengambilan ulang. Spesimen juga tidak selalu langsung diperiksa karena menunggu jumlah yang diperlukan untuk pemeriksaan. Keterbatasan reagen dan kerusakan alat pernah menyebabkan pemeriksaan tertunda, sedangkan pemeriksaan dapat dialihkan ke laboratorium lain ketika alat mengalami gangguan. Quality control tetap dilakukan dan hasil divalidasi sebelum dikeluarkan. Sistem rujukan dan pemeriksaan telah berjalan, tetapi kelancaran pemeriksaan masih dipengaruhi oleh kualitas spesimen, waktu tunggu, ketersediaan reagen, dan kondisi alat. Penguatan pengelolaan spesimen, koordinasi rujukan, ketersediaan reagen, pemeliharaan alat, dan mekanisme pemeriksaan alternatif diperlukan untuk menjaga kesinambungan pelayanan.