AbstrakLimbah filet ikan patin terutama kepala dan tulang memiliki potensi sebagai bahan baku pembuatanhidrolisat protein karena mengandung bioaktif peptida. Hidrolisat protein merupakan protein yangdihidrolisis menjadi peptida melalui proses enzimatis atau kimiawi. Penelitian ini bertujuan menentukanaktivitas pengikatan kalsium pada hidrolisat protein dari limbah filet ikan patin. Penelitian ini terdiri dari duatahap. Tahap pertama terdiri dari pembuatan hidrolisat protein secara enzimatis menggunakan konsentrasienzim papain yang berbeda. Hidrolisat protein tersebut dianalisis derajat hidrolisisnya menggunakanmetode SN-TCA sedangkan aktivitas pengikatan kalsium dengan menggunakan AAS. Tahap kedua yaituanalisis uv scanning untuk melihat penyerapan maksimum hidrolisat protein dan analisis komposisi asamamino untuk melihat komposisi asam amino yang terkandung dalam hidrolisat protein. Derajat hidrolisisyang dihasilkan dari penelitian ini berbanding lurus dengan konsentrasi enzim yang digunakan. Aktivitaspengikatan kalsium tertinggi oleh hidrolisat protein yaitu sebesar 122,73 mg L-1. Hidrolisat protein tersebutmemiliki derajat hidrolisis 43,13% dengan konsentrasi enzim 6% (v/v). Intensitas serapan pada hidrolisatprotein dengan penambahan kalsium lebih rendah apabila dibandingkan dengan intensitas absorpsihidrolisat protein, hal ini mengindikasikan adanya aktivitas pengikatan kalsium oleh hidrolisat protein.Komposisi asam amino tertinggi pada hidrolisat protein limbah filet ikan patin yaitu asam glutamat.