Abstrak. Diare merupakan salah satu penyaki menular yang disebabkan oleh berbagai macam mikroorganisme dan sering dihubungkan dengan tingkat sanitasi lingkungan. Salah satu penyebabnya adalah Vibrio cholerae. Penelitian tentang isolasi dan identifikasi telah dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fa.kultas Kedokteran Universitas Syiah Kuala. Bahan penelitian adalah air sumur penduduk Dusun Barat Kopelma Darussalam Banda Aceh sebanyak 30 sampel yang diambl secara acak, Media yang digunakan untuk isolasi dan identifikasi adalah air papton alkalki yang mengandung NaCl 3% dan pH-nya8,5 sebagai media transpor, untuk isolasi digunakan lempeng agar TCBSA (Thiosilfate Citrate Bile Sucrose Agar). Untuk identifikasi diawali dengan pewarnaan Gram dan dilajutkan uji biokimiawi terdiri dari uji sitrat, uji gula-gula, VP dan bulyon darah. Sedangkan untuk pemeriksaan serologi dipakai anti serum polivalen dan monovalen yang terdiri dari antiserum ogawa dan inaba. Hasil penelitian menunjukkan13,33% air sumur terkontaminasi oleh Vibrio cholerae. Dari pemeriksaan serologis terhadap Vibrio cholerae ditemukan 75% serotipe ogawa dan 25% serotipe inaba. (JKS 2009; 3:117-122) Kata kunci: Isolasi, identifikasi, Vibrio cholerae, air sumur Abstract. Diarrhea is an infectious disease caused by microorganism. It is usually related to level of environment sanitation. One of the microorganisms causing this disease is Vibrio cholerae. The research about isolation and identification has been conducted in Microbiology Laboratory at Medical Faculty of Syiah Kuala University with 30 samples selected randomly. The medium used for isolation and identification is alkaline peptone water containing NaCl 3% and pH of 8.5 as the transport medium. TCBSA (Thiosulphate Citrate Bile Salt Sucrose Agar) plate is used for the isolation. The identification process is begun with gram staining followed by biochemistry test consisting of citrate, glucose, VP and blood bouiJJon tests. For serology test, polyvalent and monovalent antiserum containing ogawa and inaba, The research results show that 13.33 per cent of well water is contaminated by Vibrio cholerae. The serology test on Vibrio cholerae show that there are 75 per cent of ogawa serotype and 25 per cent of inaba serotype. (JKS2009; 3: 117-122) Keywords: Isolation, identification, Vibrio cholerae, and well water.