Jamur endofit adalah jamur yang terdapat dalam sistem jaringan tumbuhan. Jamur endofit dapat menghasilkan senyawa bioaktif. Penelitian ini bertujuan untuk meskrining aktivitas antibakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ekstrak etil asetat jamur endofit dari daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.). Isolasi jamur endofit menggunakan metode tuang dengan media Sabouraud Dextrose Agar (SDA). Dari hasil isolasi didapatkan 5 jenis isolat jamur endofit dengan kodePC1,PC2,PC3, PC4 dan PC5. Selanjutnya, setiap isolat jamur dikultivasi menggunakan media beras selama 20-30 hari. Hasil kultivasi diekstraksi menggunakan pelarut etil asetat. Dari hasil ekstraksi didapatkan berat ekstrak etil asetat yang bervariasi yaitu 431-978 mg. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan konsentrasi 10 %. Berdasarkan hasil skrining aktivitas antibakteri daya hambat terbesar ditunjukan pada isolat jamur PC5 dengan diameter hambat 19,20 mm. Isolat yang memiliki aktivitas antibakteri terbesar dilanjutkan dengan pengamatan kandungan kimia. Dari skrining metabolit sekunder untuk isolat jamur PC5positif mengandung alkaloid, flavonoid dan tanin. Dari hasil di atas dapat disimpulkan daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) mengandung jamur endofit yang dapat menghasilkan senyawa antibakteri.