Penelitian ini bertujuan untuk melihat respon hasil persilangan interspesifik pada family Cucurbitaceae yang meliputi tanaman melon (Cucumis melo L), semangka (Citrullus vulgaris L) dan mentimun (Cucumis sativus L). Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juli-September 2021 di greenhouse Laboratorium Kultur Jaringan Departemen Bioteknologi PT. BISI International Tbk. Desa Tulungrejo, Kecamatan Pare, Kabupten Kediri. Bahan yang digunakan dalam persilangan ini merupakan galur-galur dari tanaman melon, semangka, dan mentimun koleksi plasma nutfah PT. BISI Internasional Tbk. Galur melon yang digunakan merupakan tipe hermaprodit sehingga perlu dilakukan emaskulasi, sedangkan galur semangka yang digunakan adalah tipe monoeciouse. Persilangan dilakukan pada pagi hari menggunakan serbuk sari dari bunga jantan yang segar. Metode penelitian menggunakan metode Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan 6 perlakuan 4 ulangan. Setiap perlakuan terdiri atas 12 persilangan. Pengamatan hasil penelitian meliputi presentase keberhasilan persilangan, jumlah buah jadi, lingkar buah jadi, dan jumlah biji pada buah jadi. Hasil pengamatan persilangan menunjukkan bahwa persilangan interspesfik pada beberapa tanaman famili Cucurbitaceae memiliki tingkat keberhasilan yang berbeda. Persilangan melon x melon menunjukkan tingkat keberhasilan sebesar 75% dengan jumlah biji per buah sebanyak 366,75. Persilangan semangka x semangka menunjukkan tingkat keberhasilan sebesar 42% dengan jumlah biji per buah sebanyak 200,00. Persilangan melon x semangka menunjukkan tingkat keberhasilan sebesar 33% dengan jumlah biji per buah sebanyak 346,44. Persilangan melon x mentimun menunjukkan tingkat keberhasilan sebesar 17% dengan jumlah biji per buah sebanyak 248,95. Persilangan semangka x melon dan semangka x mentimun menunjukkan tingkat keberhasilan 0%.