Mikroba, baik yang menguntungkan maupun yang merugikan, sangat dibutuhkan di bidang pendidikan. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan bakteri koliform yang dapat digunakan sebagai bahan praktikum di Laboratorium Teknologi Rekayasa Pangan. Bakteri ini bermanfaat untuk mempelajari mengenai cemaran mikroba pada produk olahan pangan. Terdapat tiga sampel yang digunakan yaitu sampel tanah, air sungai dan jamu tradisional. Seleksi awal dilakukan dengan pengujian kemampuan fermentasi laktosa pada medium kaldu laktosa dan agar Eosin Metylene Blue. Selanjutnya, dilakukan pengamatan mikroskopis, karakteristik biokimia dan pengurutan DNA. Hasil penelitian ini menunjukkan hanya sampel air sungai yang terdapat bakteri koliform yaitu isolat B1-01 dan B1-04. Berdasarkan pengurutan DNA, didapatkan isolat B1-01 yang memiliki kemiripan sebesar 99,86% dengan Klebsiella pneumoniae strain DSM 30104 dan B1-04 memiliki kemiripan 99,64% dengan Pseudocitrobacter faecalis strain 25 CIT. Kedua isolat tersebut dapat dijadikan contoh bakteri koliform pada praktikum di Laboratorium TRP misalnya saat mempelajari cemaran mikroba pada produk olahan pangan.