Jamur merang merupakan salah satu jamur konsumsi yang banyak disukai oleh masyarakat karena rasanya yang enak, teksturnya yang halus serta memiliki kandungan gizi yang banyak. Karena permintaan pasar yang tinggi, jamur merang memiliki prospek yang baik untuk dikembangkan. Namun, salah satu kendala dalam budidaya jamur merang adalah bibit jamur yang kualitasnya belum memadai. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan isolat dengan pertumbuhan miselia terbaik pada media PDA dan media baglog untuk dijadikan bibit sebar G5. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Bioteknologi dan Pemuliaan Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Singaperbangsa Karawang yang berlokasi di Desa Margasari, Kecamatan Karawang Timur, Kabupaten Karawang pada bulan Maret sampai Mei 2024. Metode penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktor tunggal yang terdiri dari 6 faktor. isolat yaitu isolat jamur merang jenis putih dan jamur merang jenis semi, serta isolat jamur merang Faperta Unsika (hasil persilangan dari jamur merang jenis putih, dan jamur merang jenis semi) yang meliputi isolat FP001, FP003, FP005 FP010 dan diulang sebanyak 5 kali. Pengaruh perlakuan dianalisis dengan analisis ragam taraf 1%, kemudian dilanjutkan dengan uji lanjut DMRT ( Duncan Multiple Range Test ) pada taraf 1%. Parameter yang diamati meliputi diameter pertumbuhan miselia G4 media PDA, laju pertumbuhan miselia G4, panjang pertumbuhan miselia G5 media baglog dan laju pertumbuhan miselia G5. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat perbedaan nyata antara pertumbuhan miselia isolat terseleksi dan 2 tetua jamur dari koleksi Faperta Unsika pada media PDA G4 dan media baglog G5. Isolat FP005 memberikan hasil terbaik pada diameter pertumbuhan miselia media PDA sebesar 7,382 cm dengan laju pertumbuhan terbaik pada hari ke-2 sampai ke-3 sebesar 3,890 cm/hari. Isolat FP003 memberikan hasil terbaik pada panjang pertumbuhan miselia media baglog sebesar 14,002 cm dengan laju pertumbuhan terbaik pada hari ke-8 sampai ke-9 sebesar 2,034 cm/hari. Dari hasil penelitian ini, diharapkan isolat jamur merang Faperta Unsika FP005 dan FP003 dapat dijadikan kandidat bibit sebar jamur merang unggul untuk mengembangkan budidaya jamur merang di Karawang. Kata Kunci : Isolat, Jamur Merang, Miselia, Media