Masyarakat menggunakan dispenser untuk memudahkan penyajian Air Minum Isi Ulang (AMIU). Depot Air Minum Isi Ulang (DAMIU) menjadi pilihan masyarakat membeli kebutuhan minum. Penelitian bertujuan untuk mengetahui kualitas AMIU pada dispenser dilihat dari parameter E.coli dan Coliform, perlakuan penukaran galon, lama penyimpanan stok dan penggunaan AMIU, serta kebersihan dispenser. Metode penelitian menggunakan analisis deskriptif dengan pendekatan cross sectional. Teknik pengambilan sampel menggunakan exhaustive sampling yaitu total populasi sebagai sampel sebanyak 16 petugas, sampel alat dispenser menggunakan purposive sampling berjumlah 16 unit. Hasil pemeriksaan sampel AMIU dispenser enam sampel memenuhi syarat dan 10 sampel tidak memenuhi syarat. Pemeriksaan sampel AMIU pada tiga depot terdapat Depot C memenuhi syarat sedangkan Depot A dan B tidak memenuhi syarat. Dari 16 sampel dispenser dua dispenser menggunakan Depot A, empat dispenser menggunakan Depot B, dan 10 dispenser menggunakan Depot C. Penggunaan AMIU dari Depot C tesebut enam sampel tidak mengandung E.coli ataupun Coliform sedangkan empat sampel mengandung E.coli dan Coliform, terdapat E.coli ataupun Coliform setelah digunakan pada dispenser. Kesimpulan penelitian adalah dari tiga DAMIU yang digunakan DAMIU A dan B tidak layak dikonsumsi, 16 sampel AMIU dispenser yang diperiksa terdapat enam sampel memenuhi syarat dan 10 sampel tidak memenuhi syarat.Kata kunci: Mikroorganisme, air minum dispenser