Rodensia (tikus) merupakan hewan liar dari golongan mamalia dan dikenal sebagai hewan pengganggu dalam kehidupan manusia. Penyakit bersumber Rodensia masih sangat sedikit mendapat perhatian dan dilaporkan di Indonesia. Pengetahuan masyarakat akan penyakit bersumber Rodensia yang masih rendah dan keterbatasan media informasi yang dapat dijadikan sumber informasi guna melakukan pencegahan dini terhadap resiko terkena penyakit menjadi kendala mengapa penyakit ini tidak mudah diatasi. Berdasarkan permasalahan tersebut, maka dibuat suatu penelitian dengan tujuan untuk mengembangkan suatu aplikasi komputer yang mampu melakukan diagnosa seperti layaknya seorang pakar penyakit bersumber Rodensia.Dalam penelitian ini yang menjadi obyek adalah aplikasi sistem pakar untuk diagnosa penyakit bersumber Rodensia yang terjadi pada manusia. Metode pengumpulan data dengan metode observasi, wawancara dan study literature. Tahap pengembangan aplikasi meliputi penilaian keadaan, koleksi pengetahuan, perancangan sistem, dan pembangunan struktur. Alur keputusan yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan metode forward chaining, metode yang digunakan adalah certainty factor dimana perhitungan ketidakpastian ini dapat digunakan untuk mengetahui kepastian hasil diagnosa suatu penyakit dari gejala-gejala yang dialami oleh pasien. Dan pengujian sistem dengan black box test dan alpha test.Dari penelitian yang dilakukan menghasilkan sebuah sistem yang dapat mendiagnosa penyakit bersumber Rodensia dengan kemampuan memberikan informasi untuk mendiagnosa 6 penyakit bersumber Rodensia yang disertai nama penyakit, gejala, penyebab, solusi dan nilai kepastian (CF) dari penyakit yang diderita. Hasil pengujian sistem dengan Black Box meyimpulkan bahwa sistem mampu menganalisa dan mendiagnosa penyakit bersumber Rodensia. Dan pengujian Alpha Test yang dilakukan kepada 30 (tiga puluh) responden diperoleh presentase jawaban SS = 61,67%, jawaban S = 37,5%, jawaban KS = 0,83% maka dapat disimpulkan bahwa sistem layak dipergunakan sebagai media bantu bagi masyarakat dalam mengenal dan mendiagnosa penyakit bersumber Rodensia. Untuk analisis kasus menghasilkan kesimpulan bahwa sistem perhitungan kepastian dengan CF pada aplikasi yang dibangun telah sesuai dengan teori yang diacu.Kata Kunci: Certainty Factor, Diagnosa Penyakit, Rodensia, Sistem Pakar.