Abstrak Antioksidan dapat ditemukan di alam atau dibuat secara sintetik. Salah satu antioksidan alami adalah karotenoid. Neurospohora sitophila biasa disebut sebagai jamur yang berasal dari oncom banyak mengandung karotenoid. Limbah atau ampas kecap merupakan limbah yang masih banyak mengandung protein yang tinggi. Air kelapa dapat digunakan sebagai substrat dalam fermentasi karotenoid. Penelitian ini bertujuan memanfaatkan air kelapa dan limbah kecap sebagai substart serta menentukan pengaruh penambahan kofaktor logam dalam produksi pigmen karotenoid. Neurospora sitophila diisolasi dari oncom merah, diinokulasi pada media PDA (Potato Dextrose Agar) dan diinkubasi selama 5 hari pada suhu ruangan. Suspensi spora dihasilkan dari proses inkubasi Neurospora sitophila. Limbah kecap dan air kelapa sebagai substrat ditambahkan dengan konsentrasi 10%, 15%, 20% dan 25% v/v. Selain itu ditambahkan ion logam Mg2+sebagai trace element untuk meningkatkan aktivitas enzim dan meningkatkan produksi karotenoid dalam media PDA. Dilakukan analisis pigmen karotenoid dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 450 nm dengan standar beta karoten.. Hasil penelitian menunjukkan penambahan ion logam Mg dengan substrat limbah kecap menghasilkan karotenoid sebesar 6,485 gram sedangkan penambahan ion logam Mg dengan substrat air kelapa dapat menghasilkan karotenoid sebesar 10,022 gram. Kata kunci : Neurospora sitophila, air kelapa, limbah kecap, substrat, ion logam Mg2+ , Spektrofotometer Uv-Vis Abstract Antioxidants can be found in nature or made synthetically. One of nature antioxidants is carotenoids. Neurospora sitophila also known as oncom molds that contains carotenoids. Dregs of soy sauce is soy-based waste and still has a high protein content. Coconut water can be used as a substrate in carotenoid fermentation. Neurospora sitophila isolated from red oncom to increase amount of production in PDA (Potato Dextrose Agar) media and incubated for 5 days at room temperature. Spore suspension created from results incubation of Neurospora sitophila. Make dregs of soy sauce substrate and coconut water as substrates with concentration on 10%, 15%, 20% and 25% v/v. Conducted substrate dregs of soy sauce and coconut water testing with metal ions addition Mg2+ as trace element to improve enzyme activity and increase amount of carotenoid production on PDA media. The result of carotenoid is checked for absorbance using UV-Vis Spectrophotometer at 450 nm and compared with standard beta-carotene. The results showed that metal ions Mg2+ addition on substrate dregs of soy sauce can increase carotenoids production 6,485 grams and metal ions Mg2+ 6 addition on substrate coconut water can increase carotenoids production 10,022 grams. Keywords : Neurospora sitophila, coconut water, dregs of soy-sauce, substrates, metal ions, UV-Vis Spectrophotometer