Abstrak Telah dilakukan penelitian pengaruh level substrat pada digester anaerob skala laboratorium terhadap produksi metana. Substrat yang digunakan merupakan campuran limbah kotoran sapi dan limbah cair tahu dengan perbandingan volume 2:1. Pengujian dilakukan pada variasi level substrat 65%, 75% dan 85% dari total volume digester. Substrat dikondisikan pada rentang temperatur 28 – 35 oC dan rentang ph 6,8 – 7. Analisis metode integrasi trapezoida digunakan untuk menghitung jumlah metana yang diproduksi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa produksi metana tertinggi terjadi pada level substrat 75% yaitu dengan luas produksi metana sebesar 160,93 satuan luas mililiter. Hasil yang lain menunjukkan bahwa Hidrolic Retention Time (HRT) pada variasi level substrat 65% dan 75% dari total volume digester adalah lebih cepat daripada level substrat 85% yaitu pada hari ke-25. Kata kunci: Biogas, digester, level substrat, metana.