Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kualitas semen cair sapi Bali (Bos sondaicus) yang dipreservasi dalam pengencer ringer laktat kuning telur dengan penambahan astaxhantin pada level konsentrasi berbeda. Semen segar sapi Bali ditampung menggunakan metode vagina buatan. Evaluasi makroskopis meliputi warna semen, pH, kekentalan, dan volume. Evaluasi mikroskopis meliputi konsentrasi gerakan massa, motilitas, viabilitas, dan abnormalitas spermatozoa. Hasil evaluasi terhadap semen segar sapi Bali yang memiliki nilai motilitas ≥ 70% dan abnormalitas ≤ 20% diencerkan dalam 4 perlakuan yaitu P1: TKT (100%), P1: TKT 100% + astaxanthin 0.025%, P3: TKT 100% + astaxanthin 0.050%, P4: TKT 100% + astaxanthin 0.075%. Semen cair setelah pengenceran dievaluasi terhadap motilitas spermatozoa, % viabilitas spermatozoa, dan % abnormalitas spermatozoa dan disimpan dalam lemari pendingin dengan suhu 15 °C. Pengamatan dilakukan setiap 24 jam untuk melihat % motilitas spermatozoa, % viabilitas spermatozoa, dan % abnormalitas spermatozoa. Hasil evaluasi kualitas semen cair terhadap motilitas antara perlakukan terbaik yaitu pada kombinasi RL-KT dengan penambahan astaxanthin 0.050% (P3) yaitu 50.15±14.13%. Viabilitas terbaik terdapat pada kombinasi RL-KT dengan penambahan astaxanthin 0.050% (P3) yaitu 55.41±11.34% dan abormalitas terbaik terdapat kombinasi RL-KT dengan penambahan astaxanthin 0.075% (P4) yaitu 1.17±0.27%. Berdasarkan hasil penelitian maka dapat disimpulkan bahwa kombinasi RL-KT dengan penambahan astaxanthin 0.050% (P3) sebagai pengencer terbaik yang dapat mempertahankan kualitas spermatozoa terhadap motilitas dan viabilitas spermatozoa. Selanjutnya, kombinasi RL-KT dengan penambahan astaxanthin 0.075% (P4) adalah terbaik dalam mempertahankan abnormalitas spermatozoa.