Minyak Lemuru adalah hasil limbah pengolahan ikan Lemuru dari proses pengalengan dan tepung ikan. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis pengaruh penambahan minyak ikan Lemuru dan jus daun Afrika terhadap hematologi ayam petelur. Materi yang digunakan yaitu minyak Ikan Lemuru, Daun Afrika, pakan dan ayam petelur fase pullet umur 16-18 minggu berjumlah 27 ekor. Metode penelitian adalah metode eksperimen. Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap faktorial (RALF) dengan 2 faktor percobaan dan 3 kali pengulangan. Variabel yang diamati ialah hematologi pada ayam petelur meliputi, hemoglobin, eritrosit dan hematokrit. Perlakuan adalah kombinasi pemberian minyak Ikan Lemuru dan jus Daun Afrika. Dosis minyak Ikan Lemuru dalam pakan adalah L0=Kontrol (tanpa minyak Ikan Lemuru), L1= minyak Ikan Lemuru 1,5%, L2= minyak Lemuru 3%, sedangkan dosis jud Daun Afrika dalam air minum adalah P0= Kontrol (tanpa pemberian jus Daun Afrika), A1= jus Daun Afrika 1mL, A2 = jus daun Afrika 10mL. Hasil diuji menggunakan uji two-way ANOVA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi minyak ikan Lemuru dan jus Daun Afrika memberikan interaksi yang sangat nyata (P<0,01) terhadap kadar hemoglobin ayam petelur. Kadar hemoglobin rata-rata (g/dL) adalah : L0A2=7,68, L0A1=7,85, L2A2=8,03, L1A2=8,40, L1A1=9,03, L2A1=9,08, L0A0=9,55, L1A0=12,17, L2A0=12,53. Pemberian campuran jus daun Afrika dan minyak Ikan Lemuru tidak berinteraksi (P>0,05) terhadap eritrosit ayam, akan tetapi masing-masing factor memberikan pengaruh sangat nyata (P<0,01). Rata-rata kadar eritrosi Minyak Lemuru (x10⁶/mm3) adalah : L0=2,38, L1=2,67, L2=2,91. Rata-rata kadar eritosit jus Daun Afrika (x10⁶ mm3) adalah A0=3,01, A1=2,57, A2=2,38. Penambahan jus Daun Afrika dan minyak Ikan Lemuru tidak berinteraksi (P>0,05) dengan nilai hematokrit. Rata-rata kadar hematokrit (%) adalah : L1A1=22,37, L0A0=22,50, L0A1=22,73, L2A0=22,9, L1A2=23,11, L2A1=23,18, L2A2=23,84, L1A0=24,23, L0A2=24,40. Kesimpulan penelitian adalah bahwa Penambahan Minyak Lemuru memberikan pengaruh terhadap hemoglobin, tetapi tidak mempengaruhi terhadap kadar eritrosit dan hematokrit ayam petelur. Kadar Minyak Lemuru terbaik adalah 3% dalam fungsinya meningkatkan haemoglobin.Kata Kunci : Hematologi, Layer, Minyak lemuru, Daun Afrika