Pendidikan tidak hanya menekankan pada aspek kognitif, tetapi juga afektif seperti kemampuan regulasi emosi. Regulasi emosi berperan penting dalam membantu siswa menghadapi tekanan akademik, terutama saat mengerjakan soal HOTS (Higher Order Thinking Skills) yang menuntut pemikiran tingkat tinggi sekaligus kesiapan emosional. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian soal HOTS secara tiba-tiba terhadap regulasi emosi siswa kelas XI MIPA pada materi sistem indra. Penelitian menggunakan pendekatan kuantitatif dengan metode kuasi eksperimen dan desain Pretest-Posttest Control Group Design. Sampel diambil dengan teknik cluster random sampling, yaitu kelas XI MIPA 2 sebagai kelas kontrol dan XI MIPA 3 sebagai kelas eksperimen. Instrumen yang digunakan berupa angket regulasi emosi dan soal HOTS yang telah divalidasi. Kedua kelompok sama-sama diberikan kajian soal HOTS terlebih dahulu, namun perbedaannya terletak pada waktu pemberian soal: kelas eksperimen diberikan soal HOTS secara tiba-tiba, sedangkan kelas kontrol tidak. Hasil menunjukkan bahwa kelas eksperimen mengalami peningkatan regulasi emosi yang signifikan, dari rata-rata 53,70 menjadi 61,03, sedangkan kelas kontrol hanya meningkat dari 53,15 menjadi 55,32. Uji Independent t-Test menghasilkan nilai signifikansi 0,000 (< 0,05), sehingga dapat disimpulkan bahwa pemberian soal HOTS secara tiba-tiba setelah kajian memiliki pengaruh terhadap kemampuan regulasi emosi siswa. Temuan ini menegaskan bahwa kondisi menghadapi tantangan secara mendadak, jika didahului oleh kajian kognitif, dapat melatih kesiapan emosional siswa dalam konteks pembelajaran Biologi.