Kontaminasi mikroorganisme merupakan kendala utama dalam kultur jaringan tanaman karena dapat menghambat pertumbuhan eksplan hingga menyebabkan kematian dan sumber kontaminasi kompleks. Penelitian ini bertujuan mengidentifikasi mikroorganisme kontaminan pada eksplan pisang Barangan (Musa acuminata Linn.), untuk menganalisis uji kelayakan materi dan media buku ajar mikrobiologi. Penelitian menggunakan metode kualitatif untuk mengidentifikasi mikroorganisme dan morfologinya, sedangkan metode kuantitatif menggunakan persentase untuk uji kelayakan materi dan media dari buku ajar mikrobiologi. Penelitian ini dilakukan di laboraturium kultur jaringan dinas pertanian Aceh dan laboraturium mikrobiologi prodi pendidikan biologi, dilakukan di bulan Juli 2026. Sampel berupa eksplan pisang barangan (Musa acuminata Linn.) pada tahap multiplikasi, sebanyak 4 botol eksplan dari laboraturium kultur jaringan dinas pertanian Aceh. Isolasi dan identifikasi dilkukan di laboraturium mikrobiologi UIN Ar-raniry dengan menggunakan media Nutrient Agar (NA) dan Potato Dextrose AgarĀ (PDA). Identifikasi dilakukan berdasarkan karakter makroskopis dan mikroskopis meliputi bentuk, warna, tekstur, tepian, elevasi koloni, pewarnaan Gram, serta struktur hifa dan spora. Hasil penelitian praktikum identifikasi bakteri kontaminan berasal dari genus Pseudomonas sp., Enterobacter sp., Staphylococcus sp., Acetobacter sp., Micrococcus sp., dan kelompok Enterobacteriaceae. Jamur yang ditemukan Dalam kelompok Aspergillus sp., Penicillium sp., dan Rhizopus sp. Hasil uji kelayakan materi dan media buku ajar mikrobiologi 73,01%