Kinerja pegawai menentukan keberhasilan penyelenggaraan pelayanan kesehatan di puskesmas. Di Puskesmas Kecamatan Gambir, beberapa indikator Penilaian Kinerja Puskesmas tahun 2024 belum mencapai target dan partisipasi pegawai dalam pelatihan periode 2023–2025 masih belum merata. Penelitian ini bertujuan menganalisis pengaruh pelatihan kerja terhadap kinerja pegawai di Puskesmas Kecamatan Gambir Jakarta Pusat. Penelitian kuantitatif dengan desain cross-sectional dilaksanakan pada Maret–Mei 2026. Populasi berjumlah 232 pegawai dan 119 responden dipilih menggunakan simple random sampling. Data dikumpulkan melalui kuesioner yang telah diuji validitas dan reliabilitas, kemudian dianalisis secara univariat dan menggunakan enam regresi linier sederhana secara terpisah, yaitu untuk masing-masing indikator instruktur, peserta, materi, metode, dan tujuan, serta pelatihan kerja secara keseluruhan. Sebanyak 92,4% responden menilai pelatihan kerja dalam kategori baik dan 94,1% memiliki kinerja baik. Seluruh indikator pelatihan berpengaruh positif dan signifikan terhadap kinerja (p<0,001), yaitu instruktur (B=1,937; R²=0,440), peserta (B=2,228; R²=0,447), materi (B=2,546; R²=0,602), metode (B=2,711; R²=0,626), dan tujuan (B=2,868; R²=0,718). Pelatihan kerja secara keseluruhan juga berpengaruh positif dan signifikan terhadap kinerja (B=0,608; p<0,001; R²=0,705), yang berarti 70,5% variasi kinerja pegawai dapat dijelaskan oleh pelatihan kerja. Pelatihan kerja berpengaruh positif dan signifikan terhadap kinerja pegawai. Puskesmas perlu mempertahankan pelatihan yang telah berjalan baik sekaligus meningkatkan kualitas instruktur, relevansi materi, variasi metode, kejelasan tujuan, serta pemerataan kesempatan mengikuti pelatihan.