Pendahuluan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui Pengaruh Pemberian Pupuk KNO3 dan Asam Amino Berbahan Ikan Lemuru Terhadap Pembibitan Tanaman Tembakau (Nicotiana tabacum L.) Varietas H-382. Penelitian ini dilaksanaka pada bulan Mei 2023 – Juni 2023 Kebun PTPN 1 Regional 4, Desa. Ajung, Kec. Ajung, Jember. Metode Pengumpulan Data. Terdiri dari 2 faktor. Faktor pertama adalah dosis pupuk KNO3 yang terdiri dari 3 taraf yaitu K0 = Tanpa pemberian KNO3 (Kontrol), K1= 10 g pupuk KNO3/ polybag, K2= 20 g pupuk KNO3/ polybag. Faktor kedua adalah konsentrasi pemberian asam amino berbahan ikan lemuru yang terdiri dari 3 taraf yaitu P0= Tanpa pemberian asam amino berbahan ikan lemuru (Kontrol), P1= 5%, P2= 10%. Analisa Data. Penelitian ini dilaksanakan menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK). Data Yang diperoleh dari Hasil Penelitian di Analisa Menggunakan Anova Kemudian di Uji Lanjut Menggunakan BNJ taraf 5%. Hasil dan Diskusi. Pemberian asam amino berbahan ikan lemuru terhadap pertumbuhan bibit tanaman tembakau berpengaruh sangat nyata pada parameter tinggi tanaman dengan perlakuan terbaik P2 dengan konsentrasi 10 %. Asam amino juga berpengaruh nyata pada parameter diameter batang dengan perlakuan terbaik P1 dengan konsentrasi 5% dan panjang akar dengan perlakuan terbaik P2 dengan konsentrasi 10 %. Terdapat interaksi pemberian pupuk KNO3 dan asam amino berbahan ikan lemuru terhadap pertumbuhan bibit tanaman tembakau pada parameter tinggi tanaman dan panjang akar dengan perlakuan terbaik adalah K2P2 (KNO3 20 gr/polibag dan asam amino 10%). Simpulan. Pengaruh pemberian pupuk KNO3 terhadap pertumbuhan bibit tanaman tembakau berpengaruh sangat nyata pada parameter tinggi tanaman dan panjang akar dengan perlakuan terbaik adalah K2 dengan dosis 20 gram per polybag.