Abstrak Pengembangan teknologi yang berkaitan dengan proses pembuatan etanol dari bahan berbasis laktosa melalui proses fermentasi perlu dilakukan karena masih minimnya data mengenai parameter proses fermentasi bahan berbasis laktosa. Penelitian bertujuan untuk mengetahui pengaruh suhu pada proses pembentukan etanol dari bahan berbasis laktosa melalui proses fermentasi dengan Kluyveromyces marxianus. Penelitian ini dibagi dalam beberapa tahap, yaitu (i) persiapan bahan baku yang akan digunakan sebagai media kultur; (ii) persiapan mikroba; (iii) proses fermentasi untuk menghasilkan etanol; (iv) analisis hasil fermentasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsumsi substrat oleh ragi Kluyveromyces marxianus pada suhu 30, 35, dan 40 °C berturut-turut adalah 1,484 g/L per jam, 2,053 g/L per jam, dan 2,201 g/L per jam dengan Iaju pertumbuhan biomasa berturut-turut adalah 0,107, 0,114, dan 0,115/jam, dan perolehan etanol (YP/S) berturut-turut adalah 0,156, 0,162, dan 0,105 g/g. Konsumsi substrat per waktu meningkat dan linier dengan peningkatan suhu. Hal yang serupa terjadi pada produksi biomasa yang cenderung meningkat seiring dengan peningkatan suhu, namun produksi etanol tidak bergantung pada kenaikan suhu operasi. Sedangkan konsentrasi etanol maksimum dihasilkan pada suhu optimum, yaitu 35 °C, sebesar 6,85 g/L. Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa peningkatan suhu proses fermentasi menjadi 40 °C tidak berpengaruh pada peningkatan perolehan etanol, namun dapat meningkatkan produksi biomasa Kata kunci: etanol, fermentasi batch, Kluyveromycess marxianus, laktosa, pengaruh suhu Abstract BATCH FERMENTATION OF ETHANOL PRODUCTION FROM LACTOSE BASED MATERIAL USING KLUYVEROMYCES MARXIANUS. The objective of this study was to investigate the temperature effect on ethanol production via fermentation of lactose based material using Kluyveromyces marxianus. Stages in this research are (i) culture medium preparation; (ii) microorganism preparation; (iii) ethanol production via fermentation; and (iv) fermentation broth analysis. The results showed that the substrate consumption of yeast Kluyveromyces marxianus at 30, 35, and 40 °C were 1.484, 2.053, and 2.201 g/L per hour respectively with biomass growth rate 0.107, 0.114, and 0.115/h, and ethanol yield (YP/S) 0.156, 0.162, and 0.105 g/g respectively. Substrate consumption per hour was increasing linearly with the temperature elevation. The similar tendency was occurred in biomass production. However, this trend was not followed by the ethanol production which tends to decrease. The result also showed that temperature 40 °C was the optimum condition in order to produce biomass with growth rate 0,115/h and biomass concentration 14.22 g/L. Meanwhile the maximum ethanol production 6.85 g/L was produce under condition 35 °C. It was stated that the temperature elevation untill 40 °C did not influence the ethanol productivity, instead it was found to increase the biomass productivity. Keywords: ethanol, batch fermentation, Kluyveromycess marxianus, lactose, temperature