Probiotics are a group of bacteria with health benefits, which are widely used in various nutritional products. Various efforts are made to effectively increase growth of probiotics, including adding supplemental nutrition, such as protein. In this study, a series of tests were conducted (optical density, colony forming unit, and pH test) to evaluate the effect of collagen hydrolysate supplementation, obtained from tuna waste, on the growth of Bacillus subtilis G8, a candidate of probiotic bacteria which have been isolated from the Japanese traditional food natto. The results demonstrated positive impacts of collagen hydrolysate supplementation on cell density and colony-forming units, as well as on the reduction of pH of bacterial growth medium. Concentration of 5% was observed as the most optimum concentration to support the bacterial growth, while the most acidic pH of bacterial growth medium is observed at 3% supplementation. In conclusion, supplementation of collagen hydrolysate derived from tuna waste supported the growth of B. subtilis G8 as well as reduced the pH of its growth media. Bahasa Indonesia Abstract: Probiotik merupakan sekelompok bakteri yang memiliki manfaat kesehatan dan banyak digunakan dalam berbagai produk nutrisi. Beragam upaya telah dilakukan untuk secara efektif meningkatkan pertumbuhan probiotik, salah satunya melalui penambahan nutrisi tambahan seperti protein. Dalam penelitian ini, serangkaian uji dilakukan, meliputi uji kerapatan optik, unit pembentuk koloni (CFU), dan pengukuran pH, untuk mengevaluasi pengaruh suplementasi kolagen hidrolisat yang diperoleh dari limbah ikan tuna terhadap pertumbuhan Bacillus subtilis G8, yakni kandidat bakteri probiotik yang diisolasi dari makanan tradisional Jepang, natto. Hasil penelitian menunjukkan bahwa suplementasi kolagen hidrolisat memberikan dampak positif terhadap kerapatan sel dan jumlah koloni, serta menyebabkan penurunan pH medium pertumbuhan bakteri. Konsentrasi 5% diketahui sebagai konsentrasi yang paling optimal dalam mendukung pertumbuhan bakteri, sedangkan pH terendah pada medium pertumbuhan tercatat pada konsentrasi suplementasi sebesar 3%. Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa suplementasi kolagen hidrolisat yang berasal dari limbah ikan tuna mampu mendukung pertumbuhan B. subtilis G8 serta menurunkan pH media pertumbuhannya.