Bakteri Asam Laktat (BAL) merupakan golongan bakteri yang dapat menghasilkan asam laktat sebagai produk akhir fermentasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji aktivitas enzim protease pada BAL dari tape ubi singkong dan melakukan identifikasi secara molekuler terhadap BAL yang memiliki aktivitas enzim protease tertinggi. Terdapat 6 isolat bakteri yang berhasil diperoleh melalui tahap pemurnian dan 1 isolat bakteri asam laktat yang memiliki aktivitas enzim protease tertinggi. Uji aktivitas enzim protease BAL dilakukan menggunakan media agar yang menggandung 1% susu skim dan BAL diidentifikasi secara molekuler menggunakan gen 16s rRNA. Hasil pengujian aktivitas enzim protease menunjukkan bahwa dari 3 isolat BAL yang diperoleh, hanya 1 isolat yang memiliki aktivitas enzim protease (zona bening) yaitu isolat kode 2 dengan diameter rata-rata 8,33 mm, sedangkan kontrol positif berdiameter 30 mm. Hasil identifikasi molekuler menunjukkan bahwa isolat tersebut memiliki homologi 100% dengan Leuconostoc messenteroides Strain 176.