ABSTRAKAktivitas antibakteri merupakan salah satu kriteria bagi isolat kandidat probiotik untuk dapat diaplikasikan dalam pangan fungsional. Pemanfaatan Air Susu Ibu (ASI) sebagai sumber probiotik didasari bahwa ASI merupakan bahan pangan kaya nutrisi yang mengandung human milk oligosaccharide (HMOs) sehingga menghasilkan efek bifidogenik berupa pertumbuhan bakteri menguntungkan, diantaranya adalah kelompok Bakteri Asam Laktat (BAL). Keunggulan BAL asal ASI yaitu memiliki potensi sebagai probiotik sehingga akan diperoleh isolat lokal probiotik terseleksi. Probiotik yang berasal dari manusia seperti ASI, berpeluang besar memiliki viabilitas tinggi dan adaptif pada saluran pencernaan ketika dimanfaatkan sebagai pangan fungsional. Penelitian ini diharapkan memperoleh kultur lokal probiotik asal ASI yang potensial dalam melawan bakteri patogen. Parameter pengujian yang diamati adalah aktivitas antibakteri yang dimiliki oleh 3 strain Lactobacillus paracasei (L. paracasei) asal ASI yaitu L. paracasei strain AS9, L. paracasei strain AS10 dan L. paracasei strain AS12. Sebanyak 4 bakteri patogen digunakan dalam pengujian ini, meliputi Enterococcus faecalis (Entr. faecalis) 99 EF, Staphylococcus aureus (Stph. aureus) FNCC 0047, Escherichia coli (E. coli) FNCC 0091 dan Shigella flexneri (S. flexnerii) ATCC 12022. Aktivitas penghambatan diperoleh dengan mengukur luasan zona bening yang dihasilkan selama proses inkubasi pada suhu 37ºC, 48 jam dengan metode sumuran. Berdasarkan hasil pengujian, menunjukkan bahwa Lactobacillus paracasei strain AS12 memiliki aktivitas penghambatan tertinggi dengan golongan daya hambat kuat berdasarkan luasan zona bening terhadap 4 bakteri pathogen uji. Sehingga Lactobacillus paracasei strain AS12 berpotensi dalam penghambatan bakteri patogen.  Kata Kunci: Bakteri Asam Laktat (BAL), Air Susu Ibu (ASI), L. paracasei, Antibakteri ABSTRACT                  Antibacterial activity is one of the criteria for probiotic candidate isolates to be applied in functional foods. The utilization of human milk as a probiotics source is due to nutrient-rich food containing human milk oligosaccharides (HMOs) to produce a bifidogenic factor growth of beneficial bacteria, including Lactic Acid Bacteria (LAB). The beneficial role LAB isolated from human milk is that it has the potential as a source of local probiotic isolates. Probiotics derived from humans, such as breast milk, are likely to have high viability and adaptability to the digestive tract when used as a functional food. This research is observed local cultures of probiotics from breast milk that have the potential against pathogenic bacteria. The parameters observed were the antibacterial activity of three strains of Lactobacillus paracasei (L. paracasei) asal ASI yaitu L. paracasei strain AS9, L. paracasei strain AS10 and L. paracasei strain AS12. A total of four pathogenic bacterias were used, including Enterococcus faecalis (Entr. faecalis) 99 EF, Staphylococcus aureus (Stph. aureus) FNCC 0047, Escherichia coli (E. coli) FNCC 0091 and Shigella flexneri (S. flexnerii) ATCC 12022Inhibition zone was obtained by measuring the clear zone area produced during incubation at 37ºC for 48 h with the well diffusion method. The results showed that Lactobacillus paracasei strain AS12 had the highest inhibitory activity with the strong inhibition category based on the clear zone area against the four pathogenic bacterias. So that L. paracasei strain AS12 has the potential to inhibit pathogenic bacteria. Keywords: Lactic Acid Bacteria (LAB), Human milk, L. paracasei, antibacterial