Video densitometri merupakan metode analisis kuantitatif densitometri dengan prinsip pemindaian optik elektronik. Kromatografi lapis tipis (KLT) dapat menghasilkan data pemisahan yang cepat dan desain instrumen sederhana secara simultan, sehingga meningkatkan sensitivitas dan kompatibilitas dengan analisis data. Metode ini sederhana, murah, dan cepat untuk menghitung bercak pada pelat KLT. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh metode analisis penentuan thiamphenicol dalam sirup kering. Untuk tujuan ini, KLT video telah dikembangkan dan divalidasi. Analisis tiamfenikol tersebut dilakukan melalui beberapa tahap, antara lain optimasi kondisi KLT, perekaman bercak KLT dengan kamera, analisis bercak dengan ImageJ, validasi metode analisis, dan analisis tiamfenikol dalam sirup kering. Kondisi optimum untuk KLT menggunakan pelat silika gel GF254 dengan fase gerak etil asetat:kloroform:metanol (7,5:2:0,5, v/v/v). Deteksi dilakukan di bawah lampu UV 254 nm, kemudian difoto menggunakan kamera digital Sony Alpha A5100 dengan sensitivitas ISO 100, titik fokus 50 mm, aperture f/6, dan shutter speed 1/15 detik. Gambar yang diambil dianalisis menggunakan perangkat lunak ImageJ untuk menentukan nilai AUC setiap bercak. Uji selektivitas menghasilkan nilai α lebih besar dari 1,5. Hasil validasi metode diperoleh persamaan regresi y = 1.7481x + 16498 (r = 0,9995; Vx0 = 0,80%). Batas deteksi dan batas kuantitasi masing-masing sebesar 21,78 dan 72,60 bpj. Presisi (%RSD) dalam satu hari dan antar hari masing-masing adalah 1,07 dan 1,34%. Akurasi dilakukan dengan menggunakan simulasi sampel untuk mendapatkan persen perolehan kembali direntang 96,62 - 100,91%. Kadar tiamfenikol ditentukan pada tiga produk sirup kering dan bervariasi masing-masing sebesar 99,26%, 101,25%, dan 101,81%. Metode KLT video densitometri dapat digunakan sebagai metode alternatif analisis tiamfenikol sirup kering.