Claim Missing Document
Check
Articles

Found 2 Documents
Search
Journal : Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology

Ekspresi Prethrombin-2 Manusia Recombinan dalamPichia pastoris dan Optimasi Kondisi Ekspresinya Gaffar, Shabarni; Upay, Purba; Maksum, Iman Permana; Hasan, Khomaini; Subroto, Toto; Enus, Sutarya; Soemitro, Soetijoso; Pertiwi, Wulan
Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology Vol 4, No 1 (2017)
Publisher : Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology

Show Abstract | Download Original | Original Source | Check in Google Scholar | Full PDF (566.296 KB) | DOI: 10.15416/ijpst.v4i1.9766

Abstract

Pretrombin merupakan prekursor dari trombin yang memiliki aktivitas proteolitik. Trombin merubah fibrinogen menjadi benang fibrin yang salah satu aplikasinya adalah dapat digunakan sebagai lem untuk menggantikan teknik jahitan pasca bedah. Aplikasi trombin untuk pembuatan lem fibrin menuntut diproduksinya trombin rekombinan. Tujuan dari penelitian ini adalah ekspresi gen pretrombin-2 (PT2) manusia rekombinan menggunakan sistem ekspresi Pichia pastoris. Gen pengode PT2 dirancang sesuaidengan kodon preferensi P. pastoris. Fragmen PT2 diamplifikasi dengan metoda PCR dengan penambahan sisi restriksi EcoR1 pada ujung 5’ dan sisi restriksi SacII pada ujung 3’. Produk PCR yang berukuran 924 pb diligasi dengan vektor ekspresi pPICZaB untuk P. pastoris dan disubkloning dalam inang Escherichia coli. Urutan nukleotida dikonfirmasi dengan metoda dideoxy Sanger. Plasmid rekombinan pPICZaB-PT2 kemudian digunakan untuk mentransformasi P. pastoris SMD1168 defisien protease dengan metoda elektroporasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa gen PT2 berhasil diamplifikasi dan dikloning dalam E. coli. Analisis restriksi dan penentuan urutan DNA menunjukkan bahwa PT2 rekombinan 100% homologi dengan hasil rancangan. Hasil ekspresi PT2 oleh P. pastoris menggunakan metanol sebagai inducer memperlihatkan bahwa PT2 dengan berat molekul 35 kDa berhasil diekspresikan. Optimasi kondisi ekspresi melalui variasi konsentrasi metanol sebagai inducer dan sorbitol sebagai sumber karbon tambahan menunjukkan bahwa metanol 2% dan sorbitol 2% merupakan kondisi optimum ekspresi PT2.
Ekspresi Prethrombin-2 Manusia Recombinan dalamPichia pastoris dan Optimasi Kondisi Ekspresinya Shabarni Gaffar; Purba Upay; Iman Permana Maksum; Khomaini Hasan; Toto Subroto; Sutarya Enus; Soetijoso Soemitro; Wulan Pertiwi
Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology Vol 4, No 1 (2017)
Publisher : Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology

Show Abstract | Download Original | Original Source | Check in Google Scholar | Full PDF (566.296 KB) | DOI: 10.15416/ijpst.v4i1.9766

Abstract

Pretrombin merupakan prekursor dari trombin yang memiliki aktivitas proteolitik. Trombin merubah fibrinogen menjadi benang fibrin yang salah satu aplikasinya adalah dapat digunakan sebagai lem untuk menggantikan teknik jahitan pasca bedah. Aplikasi trombin untuk pembuatan lem fibrin menuntut diproduksinya trombin rekombinan. Tujuan dari penelitian ini adalah ekspresi gen pretrombin-2 (PT2) manusia rekombinan menggunakan sistem ekspresi Pichia pastoris. Gen pengode PT2 dirancang sesuaidengan kodon preferensi P. pastoris. Fragmen PT2 diamplifikasi dengan metoda PCR dengan penambahan sisi restriksi EcoR1 pada ujung 5’ dan sisi restriksi SacII pada ujung 3’. Produk PCR yang berukuran 924 pb diligasi dengan vektor ekspresi pPICZaB untuk P. pastoris dan disubkloning dalam inang Escherichia coli. Urutan nukleotida dikonfirmasi dengan metoda dideoxy Sanger. Plasmid rekombinan pPICZaB-PT2 kemudian digunakan untuk mentransformasi P. pastoris SMD1168 defisien protease dengan metoda elektroporasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa gen PT2 berhasil diamplifikasi dan dikloning dalam E. coli. Analisis restriksi dan penentuan urutan DNA menunjukkan bahwa PT2 rekombinan 100% homologi dengan hasil rancangan. Hasil ekspresi PT2 oleh P. pastoris menggunakan metanol sebagai inducer memperlihatkan bahwa PT2 dengan berat molekul 35 kDa berhasil diekspresikan. Optimasi kondisi ekspresi melalui variasi konsentrasi metanol sebagai inducer dan sorbitol sebagai sumber karbon tambahan menunjukkan bahwa metanol 2% dan sorbitol 2% merupakan kondisi optimum ekspresi PT2.
Co-Authors Achmad, Nurjannah Akmal Dhaffa Ulhaq Amallia Ardila Putri Andreanus Andaja Soemardji Andreas A Soemardji Andrian R, Andri Ania Kurniawati Purwa Dewi Arsyad Parama Santosa Audrey, Gabriella Budiantoro, Ogi Cicilia Liempapas D Agus Yusuf Wildan Daswara Djajasasmita Desi Veronika Pardosi DESSY NATALIA Dewi R Handayani Dian Anggraeny Eka Noneng Nawangsih Elly Noer Rochmah, Elly Noer Endry Septiadi Endry Septiadi et al Evi Sovia FERNITA PUSPASARI Gabriella Audrey Gabriella, Janifer Handayani, Dewi Ratih I Gede Eka Perdana Putra, I Gede Eka Perdana Iis I Rakhmat Iis Inayati Rahmat Ilma Fiddiyanti Iman Permana Maksum Iman Permana Maksum IMAN PERMANA MAKSUM Iman Permana Maksum Iman Permana Maksum IMAN PERMANA MAKSUM Inayati, Iis Indarti Trimurtini Indriyana, Sri Quintina IS HELIANTI Janifer Gabriella Liempapas, Cicilia Luvina, Petrisia Maria Ulfah MEILINAH HIDAYAT Meilinah Hidayat Mohammad Yusuf Muhammad Fadhil Z, Rusdi Noor Rosa (p:43-50) Murniaty Simorangkir Mutiara, Dinar N Ferdianti, Fine NIKNIK NURHAYATI OGI BUDIANTORO Ogi Budiantoro P Y Paryati, Sayu Pertiwi, Wulan Petrisia Luvina Purba Upay Ratunanda, Susanti Riezki Amalia Rini Roslaeni Sabbathini, Gabriela Christy Safari, Ardhi Ryanto SARONOM SILABAN Saronom Silaban Saronom Silaban Sayu Putu Yuni Paryati Sayu Putu Yuni Paryati Septiadi, Endry Shabarni Gaffar Shabarni Gaffar -, Shabarni Gaffar SHABARNI GHAFFAR Sigit Sasongko Sijani Prahastuti Sijani Prahastuti Sijani Prahastuti Siska Telly Pratiwi Soemardji, Andreas A Soetijoso Soemitro Soetijoso Soemitro Soetijoso Soemitro Soetijoso Soemitro SOETIJOSO SOEMITRO Sutan Bagas Prakasa Sutarya Enus Sutarya Enus Sutarya Enus SUTARYA ENUS Toto Subroto Upay, Purba WANGSA TIRTA ISMAYA Welly Ratwita Wulan Pertiwi Wulandari, Sri Rezeki Yudith Y Kusmala Yudith Yunia K Yulistio Hanif